Respaldo científico de Green Sap®

La línea empleada corresponde a un linfoma T murino, denominado BW5147, proveniente de un tumor espontáneo de ratones AKR/J adaptado a cultivo, originado en los Laboratorios Jackson, USA. El mismo es sensible a cortisol (10⁻⁶ M) y expresa el haplotipo H-2k y los siguientes marcadores: CD3+, receptor T αβ y Thy 1.1, los que son rutinariamente chequeados por citometría de flujo con anticuerpos monoclonales específicos.

Las células BW5147 (3-5 × 10⁵ cel/ml) se cultivaron en medio RPMI 1640 suplementado con 10 % de suero fetal bovino y 2 mM de glutamina en presencia de los antibióticos penicilina (100 U/ml) y estreptomicina (100 µg/ml), en placas de 96 pocillos (volumen final 0.2 ml), en condiciones de esterilidad (flujo laminar, Steril Guard Hood class II), y en ambiente gaseado con 5 % de CO₂. Se realizaron cultivos con concentraciones crecientes de los extractos vegetales durante 24, 48 y 72 hs de incubación. Las células fueron pulsadas con 0.75 µCi/pocillo de [³H]TdR (S = 25 Ci/mmol) 16 hs antes del sacrificio de los cultivos. La [³H]-TdR incorporada al ADN nuclear se cuantificó por espectrometría de centelleo líquido. Los resultados se expresaron como Porcentaje de Inhibición (% Inhib) considerando como 100 % a las dpm obtenidas en ausencia de extracto.

La viabilidad celular a distintos tiempos en presencia o ausencia de TM y PF fue evaluada mediante conteo celular microscópico en cámara de Neubauer, empleando un colorante de exclusión, el Azul Tripán. Los % de Viabilidad correspondientes se calcularon teniendo en cuenta la cantidad de células vivas (que no incluyen el colorante de exclusión) con respecto al total de células (Vivas + Muertas, es decir aquellas células que incorporan el colorante y se ven de color azul a la observación microscópica).

Los resultados fueron analizados mediante el Test de Student y Análisis de Varianza seguida del test de Dunnet para determinar las diferencias significativas entre grupos. Los valores se consideraron estadísticamente significativos cuando p ≤ 0.05.